Стресс протекторное действие это

научная статья по теме СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ СИНТЕТИЧЕСКОГО ПЕПТИДА KKRR, СООТВЕТСТВУЮЩЕГО ФРАГМЕНТУ 15–18 АДРЕНОКОРТИКОТРОПНОГО ГОРМОНА ЧЕЛОВЕКА Химия

Цена:

Авторы работы:

Текст научной статьи на тему «СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ СИНТЕТИЧЕСКОГО ПЕПТИДА KKRR, СООТВЕТСТВУЮЩЕГО ФРАГМЕНТУ 15–18 АДРЕНОКОРТИКОТРОПНОГО ГОРМОНА ЧЕЛОВЕКА»

БИООРГЛНИЧЕСКЛЯ ХИМИЯ, 2009, том 35, № 1, с. 25-29

СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ СИНТЕТИЧЕСКОГО ПЕПТИДА KKRR, СООТВЕТСТВУЮЩЕГО ФРАГМЕНТУ 15-18 АДРЕНОКОРТИКОТРОПНОГО ГОРМОНА ЧЕЛОВЕКА

© 2009 г. В. Б. Садовников*, А. И. Сажин*, Ю. А. Золотарев**, Е. В. Наволоцкая*#

*Филиал Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, 142290,

Московская обл., г. Пущино, просп. Науки, 6; **Институт молекулярной генетики РАН, Москва Поступила в редакцию 02.04.2008 г. Принята к печати 29.04.2008 г.

Изучена активность синтетического пептида KKRR, соответствующего аминокислотной последовательности 15-18 адренокортикотропного гормона (ACTH) человека, и его аналогов KKKK, RRRR, RRKK, kKRR, KkRR, KKrR, KKRr (строчной буквой обозначены аминокислоты D-ряда) при холодовом и тепловом шоке у крыс in vivo. Установлено, что интраназальное введение пептида KKRR в дозе 2-10 мкг/жи-вотное за сутки до шока предотвращает резкое возрастание уровня кортикостерона в надпочечниках и плазме крови крыс, вызванное температурным воздействием. Показано, что аминокислотные замены в пептиде KKRR приводят к резкому снижению активности: аналоги пептида проявляли низкую стресс-протекторную активность и обладали низким сродством к рецептору ACTH.

Ключевые слова: адренокортикотропный гормон (ACTH), пептиды, рецепторы; аденилатцикла-за; кора надпочечников, стресс.

Стресс (от английского «stress» — напряжение) -это одна из общих неспецифических нервно-гуморальных реакций организма человека и животных на действие «чрезвычайных» раздражителей (стрессоров), которая в основном определяется деятельностью гипоталамуса, гипофиза и надпочечников. Стресс имеет защитное значение и направлен на восстановление нарушенного гомеостаза. В условиях резкого изменения климата, ухудшения экологической обстановки, непрерывного возрастания психоэмоциональных нагрузок изучение молекулярных механизмов стресса стало одним из важнейших направлений исследования современных биологии и медицины. Ранее [1, 2] нами с целью поиска новых эффективных и безопасных средств, способных повысить адаптационные возможности организма и защитить его от негативного действия экстремальных факторов внешней среды, были синтезированы пептиды с ACTH-подобной структурой и исследована их активность in vitro и in vivo. Изучение рецепции пептидов показало, что ACTH-(15-18) (KKRR) — это самый короткий фрагмент ACTH, способный связываться с рецептором гормона. Пептид KKRR с высоким сродством и специфичностью связывался с мембранами коры надпочечников крысы (для комплек-

Сокращения: ACTH — адренокортикотропный гормон; SEM -стандартная ошибка среднего. #Автор для связи (тел.: (4967) 73-66-68; факс: (4967) 33-05-27; эл. почта: navolots@fibkh.serpukhov.su).

са [3H] KKRR-рецептор — Kd = 2.1 нМ), но не влиял на активность аденилатциклазы, т.е. действовал как антагонист ACTH.

Цель настоящей работы — исследование действия пептида KKRR и его аналогов при холодовом и тепловом шоке у крыс in vivo и анализ связи между структурой пептидов и их активностью.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Американские исследователи Коста и соавт. [3] получили аналоги ACTH-(1-24) с аминокислотными заменами остатков Lys и Arg на Ala в области 15-18 (K15A;R17A, K16A;R17A и K16A;R18A) и показали, что они обладают низкой активностью in vivo: соответственно 14, 8 и 9% от активности нативного ACTH (1-24). Сравнительный анализ первичной структуры ACTH позвоночных показал, что область молекулы 15-18 (KKRR) эволюционно высоко консервативна. Коста и соавт. предположили, что этот участок необходим для связывания с рецептором и (или) дальнейшей активации аденилатциклазы.

Нами с целью определения фрагмента ACTH наименьшей длины, способного с высоким сродством связываться с рецептором ACTH, были синтезированы пептиды — фрагменты ACTH-(11-24) и исследована их способность ингибировать специфическое связывание [3H]ACTH-(11-24) с мембранами коры надпочечников крысы [1, 2]. Оказалось, что самым коротким активным пептидом является ACTH-(15-18) (KKRR) (Ki 2.3 ± 0.2 нМ). Был полу-

САДОВНИКОВ и др.

Таблица 1. Влияние введения пептида ККЯЯ крысам на содержание кортикостерона в надпочечниках и плазме крови при холодовом и тепловом шоке*

Воздействие шока Введение KKRR, мкг/крыса Содержание кортикостерона**, %

— — (ФР) 100 ± 10 (112.8 ±11.3 мкг/г) 100 ± 12 (40.7 ± 4.8 мкг/мл)

— 10 (ФР) 98.1 ± 9.2 97.4 ± 9.3

Холодовой шок — (ФР) 210.6 ± 9.3 160.3 ± 10

10 97.3 ± 10.5 100.7 ± 9.0

5 100.4 ± 9.4 105.2 ± 10.1

2 107.2 ± 8.6 111.4 ± 11.0

1 128.4 ± 8.4 118.3 ± 10.8

Тепловой шок — (ФР) 306.1 ± 8.8 192.3 ± 9.8

10 103.9 ± 9.1 101.0 ± 10.2

5 105.6 ± 10.1 108.5 ± 11.0

2 110.2 ± 9.9 114.3 ± 10.6

1 129.1 ± 10.6 125.6 ± 10.7

* ФР — введение физиологического раствора; прочерк означает отсутствие воздействия (шока или введения пептида). ** P

naukarus.com

научная статья по теме СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕКСА ФЕНИЛПРОПАНОИДОВ НА РАСТЕНИЯ КАРТОФЕЛЯ IN VITRO Биология

Научный журнал:

Год выхода:

Текст научной статьи на тему «СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕКСА ФЕНИЛПРОПАНОИДОВ НА РАСТЕНИЯ КАРТОФЕЛЯ IN VITRO»

ФИЗИОЛОГИЯ РАСТЕНИЙ, 2014, том 61, № 2, с. 275-282

СТРЕСС-ПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕКСА ФЕНИЛПРОПАНОИДОВ НА РАСТЕНИЯ КАРТОФЕЛЯ IN VITRO © 2014 г. Л. А. Волкова, В. В. Урманцева, А. Б. Бургутин

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии растений им. К.А. Тимирязева РАН, Москва Поступила в редакцию 25.12.2012 г.

Исследовано влияние комплекса фенилпропаноидов (КФП), выделенного из экстракта корней ро-диолы розовой (Rhodiola rosea L.), на растения картофеля (Solanum tuberosum L.) in vitro с целью идентификации факторов, обуславливающих поддержание внутриклеточного редокс-гомеостаза. Обнаружено, что обработка растений КФП в концентрации 100 мкМ приводила к снижению на 23% пе-роксидазной активности в клетках растений картофеля, а также к обратимому увеличению уровня перекисного окисления липидов (ПОЛ) в условиях окислительного стресса, вызванного действием параквата. В присутствии НАД-Н, известного оксидазного субстрата пероксидаз (ПО), показано, что снижение пероксидазной активности связано с «переключением» пероксидазы на выполнение этим ферментом оксидазной функции. Этот эффект сопровождался увеличением активности су-пероксиддисмутазы на 34% и повышением уровня ПОЛ — также на 34%. Стимуляция этих процессов под действием КФП снижалась на 14 и 24%, соответственно, после предварительной обработки растений дифенилен иодониумом, ингибитором НАДФ-Н-оксидазы. Это может указывать на участие «тандема» ПО—НАДФ-Н-оксидаза в генерации активных форм кислорода. Наряду со снижением пероксидазной реакции ПО, наблюдался и обратный эффект — усиление ее активности через 3 ч после действия КФП, что связано со способностью КФП переключать функции пероксидаз с окислительной на восстановительную и обратно. Установлено, что наблюдаемые эффекты КФП включают в себя не только соответствующую модуляцию активности антиоксидантных ферментов, но и прямое тушение активных радикалов кислорода. Последний эффект, выявленный по интенсивности снижения в препаратах уровня супероксид-аниона, у КФП значительно превосходил действие индивидуальных антиоксидантов — салидрозида и аскорбиновой кислоты, ингибирующая активность которых была в 5 раз меньше таковой КФП.

Ключевые слова: Rhodiola rosea — Solanum tuberosum — in vitro — фенилпропаноиды — антирадикальные свойства — окислительный стресс

В течение последнего десятилетия наблюдается рост числа публикаций, посвященных исследованию антиоксидантных свойств различных классов соединений. Значительную часть из них представляют соединения фенольного комплекса, обладающие высокой окислительно-восстановительной активностью. Антиоксидантные свойства фенолов связаны с наличием в их структуре слабых фенольных гидроксильных групп, которые легко отдают атом водорода при взаимо-

Сокращения: КФП — комплекс фенилпропаноидов; ПО — пероксидаза; СОД — супероксиддисмутаза: ТБК-АП — комплекс тиобарбитуровой кислоты и взаимодействующих с ней активных продуктов.

Адрес для корреспонденции: Волкова Людмила Александровна. 127276 Москва, Ботаническая ул., 35. Институт физиологии растений им. К.А.Тимирязева РАН. Электронная почта: la-volkova@yandex.ru

действии со свободными радикалами [1], что способствует ингибированию процессов радикально-цепного окисления в организме, защищая таким образом биомолекулы (липидные мембраны, белки, ДНК) от окисления. Однако наряду с ан-тиоксидантным действием фенольным соединениям свойственно проявление в определенных условиях прооксидантных свойств [2].

Среди фенольных соединений с высокой окислительно-восстановительной активностью, значительное место занимают фенилпропаноиды родиолы розовой. Основными действующими веществами этого растения являются гликозиды коричного спирта (розавин, розин, розарин) и салид-розид, из группы простых фенольных соединений [3]. При неблагоприятных условиях происходит активация фенилпропаноидного метаболизма, что приводит к формированию устойчивости расте-

ний к действию стрессовых факторов [4]. В борьбе со свободными радикалами принимают участие не только антиоксидантные вещества, вырабатываемые растительными клетками, но и антиоксиданты, поступающие в клетки при их экзогенном воздействии [5]. Препараты на основе растительного сырья, содержащего фенилпро-паноиды, которые давно и успешно применяются в медицинской практике [6], требуют дополнительного изучения их действия и на растительные объекты. К настоящему времени известны лишь немногочисленные доказательства защитного действия фенольных соединений (в основном флавоноидов) при их экзогенном воздействии на растения [7—9].

Фенольные соединения способны не только непосредственно ингибировать протекание свободно-радикальных процессов в клетке, но и участвовать в обезвреживании Н2О2 и органических пероксидов при окислении фенол-зависимыми пероксидазами. В защите растительных клеток от окислительного стресса важную роль играет гваяколовая пероксидаза (ПО). Этот фермент привлекает особое внимание, поскольку обладает высоким сродством к Н2О2, которая активно продуцируется при окислительном стрессе [10, 11]. Однако функции ПО не ограничиваются только детоксикацией перекисей; наряду с деток-сикацией, фермент участвует также и в их образовании. Как свидетельствуют данные литературы, при окислении полифенолов некоторые апо-пластные ПО проявляют свою оксидазную — про-оксидантную функцию, что способствует образованию O2-, Н2О2 и радикалов органического субстрата при физиологическом значении рН [8]. Существенный вклад в генерацию АФК может вносить и НАДФ-Н-оксидаза. В процессе каталитической реакции фермент способен генерировать свободные радикалы — O^, ОН* и радикалы органического субстрата [12, 13]. Считается, что основной пул НАДФ-Н-оксидазы у растений локализован в плазмалемме [13].

Цель настоящей работы заключалась в изучении действия КФП на растения картофеля в условиях окислительного стресса и выявлении ферментативного источника АФК при участии КФП в пероксидазных реакциях, а также определение антирадикального свойства КФП по отношению к супероксид-аниону в сравнении с действием индивидуальных антиоксидантов — салидрозида и аскорбиновой кислоты.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Объектом исследования служили растения картофеля (Solanum tuberosum L.) сорта Дезире, поддерживаемые в пробирочной культуре на агари-

зованной среде с половинной дозой МС-солей и 1% сахарозой. Растения культивировали на свету (освещенность 2.5—3.0 клк, лампы ЛБ80) при фотопериоде 18 ч и температуре 24—26°С в камере фитотрона ИФР РАН. Для анализа использовали листья 4-недельных растений.

Применение КФП и индуктора окислительного стресса параквата.

Препарат КФП был предоставлен проф. А.П. Дас-калюком (АН Республики Молдова) и представлял собой фракцию фенилпропаноидов из экстракта корней и корневищ родиолы розовой (Rhodiola rosea L). Расчет концентраций КФП производили по молекулярной массе розавина, который содержится в экстракте родиолы розовой в значительных количествах и имеет высокую биологическую активность, совпадающую с биологической активностью препаратов на основе родиолы розовой, а также считается диагностическим веществом, так как не содержится в других видах родиолы [3]. В экспериментах использовали КПФ в концентрации 100 мкМ. Проведенные нами ранее исследования на клетках диоскореи дельтовидной [14] показали, что концентрация КФП 100 мкМ была предельной, при которой он не проявлял токсичность и имел высокую антиокислительную активность. Растения обрабатывали КФП в течение 30 мин, заливая раствор препарата в пробирки до полного погружения растения в раствор. После 30 мин экспозиции раствор удаляли. Реакцию растений на последействие КФП изучали в интервалах — от 1 ч до 1 суток после обработки.

Окислительный стресс индуцировали с помощью специфического прооксиданта — параквата (метилвиологена). Обработку паракватом в концентрации 50 мкМ проводили, заливая растения раствором на 15 мин. При исследовании действия КФП и параквата вначале проводили обработку растений погружением в раствор КФП (100 мкМ, 30 мин), а затем, после удаления раствора, обрабатывали паракватом (50 мкМ, 15 мин). Контролем служили исходные растения после 30-минутной обработки дистиллированной водой.

Антирадикальную активность по отношению к супероксид-аниону определяли по методу, описанному в работе [15], используя показатель (% ингибирования), который отражает долю, на которую снижается концентрация супероксида в системе под действием КФП. Система генерации супероксид-аниона была использована аналогично таковой при определении активности СОД (см. ниже определение активности СОД) и заключалась во взаимодействии метионина и рибофлавина при освещении, а в качестве детектора супероксида использовали нитросиний тетразо-лий. Для сравнения с действием КФП применяли эквиваленты аскорбиновой кислоты и салидро-

зида. Последний был получен из корней и корневищ родиолы розовой в ВИЛАР (Москва) и в виде кристаллического порошка предоставлен для проведения экспериментов.

Содержание вторичных продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по ТБК-те-сту с образованием окрашенных комплексов тио-барбитуровой кислоты при высокой температуре в кислой среде. Содержание ТБК-активных продуктов (ТБК-АП) рассчитывали с использованием коэффициента экстинкции малонового диаль-дегида, равного 155/(ммоль см) и выражали в мкмоль/г сырой массы [16].

Определение активности ферментов. После гомогенизации листьев (200—250 мг) в 0.1 М калий-фосфатном буфере соответствующего рН (7.8 — для СОД и 6.7 — для ПО), гомогенат центрифугировали при 10 000 g в течение 10 мин, и полученный супернатант использовали для определения активности ферментов.

Общую активность супероксиддисмутазы (СОД, КФ 1.15.1.11) определяли по известному методу [17] и выражали в отн. ед./г сырой массы.

Активность гваякол-зависимой формы перок-сидазы (КФ 1.11.1.7) определяли по изменению оптической плотности при 470 нм реакционной смеси. Активность пероксидазы рассчитывали по количеству окисленного г

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

Пoхожие научные работы по теме «Биология»

БУРГУТИН А.Б., ВОЛКОВА Л.А., НОСОВ А.М., УРМАНЦЕВА В.В. — 2013 г.

БУРГУТИН А.Б., ВОЛКОВА Л.А., НОСОВ А.М., УРМАНЦЕВА В.В. — 2015 г.

ЖЕСТКОВА И.М., ПИОТРОВСКИЙ М.С., ТРОФИМОВА М.С., ШЕВЫРЕВА Т.А. — 2011 г.

БОРОВСКИЙ Г.Б., ВОЙНИКОВ В.К., ГРАСКОВА ИРИНА АЛЕКСЕЕВНА, КОЛЕСНИЧЕНКО А.В. — 2004 г.

действие протекторное

Русско-казахский терминологический словарь «Медицина». — Академия Педагогических Наук Казахстана. . 2014 .

Смотреть что такое «действие протекторное» в других словарях:

Тканевый стресс — … Википедия

Тыквеол капсулы 450 мг — Действующее вещество ›› Тыквы обыкновенной семян масло (Cucurbitae semenis oleum) АТХ: ›› A05AX Прочие препараты для лечения заболеваний желчевыводящих путей Фармакологические группы: Гепатопротекторы ›› Желчегонные средства и препараты желчи ››… … Словарь медицинских препаратов

Тыквеол масло для приема внутрь — Действующее вещество ›› Тыквы обыкновенной семян масло (Cucurbitae semenis oleum) АТХ: ›› A05AX Прочие препараты для лечения заболеваний желчевыводящих путей Фармакологические группы: Гепатопротекторы ›› Желчегонные средства и препараты желчи ››… … Словарь медицинских препаратов

Тыквеол суппозитории ректальные — Действующее вещество ›› Тыквы обыкновенной семян масло (Cucurbitae semenis oleum) АТХ: ›› G04CX Прочие препараты для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы Фармакологические группы: Гепатопротекторы ›› Желчегонные средства и… … Словарь медицинских препаратов

Транквилизаторы — (лат. tranquillo – делать спокойным) – группа психотропных препаратов, устранящих страх, тревогу и аффективную напряжённость, которые свойственны преимущественно невротическим расстройствам. Антипсихотическим действием, способностью устранять… … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике

Луцетам — Действующее вещество ›› Пирацетам* (Piracetam*) Латинское название Lucetam АТХ: ›› N06BX03 Пирацетам Фармакологическая группа: Ноотропы Нозологическая классификация (МКБ 10) ›› F03 Деменция неуточненная ›› F10.2 Синдром алкогольной зависимости… … Словарь медицинских препаратов

Диабетическая ретинопатия — Диабетическая ретинопатия … Википедия

Тенотен — (Tenoten) – лекарственный препарат, оказывает анксиолитическое, антидепрессивное, ноотропное, стресс протекторное, антиастеническое, антигипоксическое, нейропротекторное действие. Тенотен показан к применению при лечении астении, а также неврозов … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике

medical_ru_kaz.academic.ru

Стресс-протекторные свойства антиоксиданта «Гувитан»

Развитие стресс-реакции сопровождается активацией процессов свободнорадикального окисления липидов на фоне депрессивных изменений в антиоксидантной системе организма [1]. Это приводит к накоплению в организме токсических продуктов перекисного окисления липидов и к деструктивным изменениям клеточных мембранных образований, что усугубляет отрицательные последствия стресса. В настоящее время доказано, что одной из стресс-лимитирующих систем организма является система антиоксидантной защиты [2] эффективными регуляторами которой являются антиоксиданты. Это позволяет ожидать наличие у веществ этой группы стресс-протекторных свойств.

В опытах на курах проведено изучение стресс-протекторной активности антиоксиданта «Гувитан» и его влияния на некоторые показатели системы антиоксидантной защиты организма.

Установлено, что применение «Гувитана» на 14,8 % уменьшает потери массы тела в течение периода иммобилизации у опытных крыс по сравнению с контрольными. У животных опытной группы при этом менее выражены характерные для «триады Селье» гипертрофия надпочечников, инволюция селезенки и тимуса, язвенные поражения слизистой желудка. Суммарная площадь язвенных поражений желудка у опытных крыс была на 41,3 % меньше, чем у контрольных.

Во втором опыте проведено изучение стресс-протекторной эффективности «Гувитана» на 60-дневных курах мясо-яичного направления. Птице опытной группы (п=12) применяли «Гувитан» в смеси с кормом в течение трех месяцев. Курам контрольной группы (п=12) никакие препараты не применялись. В течение последних 60 дней эксперимента куры подвергались хроническому холодовому воздействию (t = -5 + -10°C).

Установлено, что в результате длительного холодового воздействия у птиц обеих групп развивается состояние хронического стресса. Однако у птицы, получавшей «Гувитан», в меньшей степени, чем у контрольных кур развивается гипертрофия надпочечников (на 37,5%), инволюция селезенки (на 16,8%), Относительный прирост массы тела у опытных кур в течение всего опыта был выше, чем в контроле, на 4%.

В условиях хронического стресса у птицы, получавшей «Гувитан», в крови, печени и мозге сохранялся более низкий уровень малонового диальдегида. Менее выраженная активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) у опытных животных в условиях хронического холодового стресса обеспечивалась более высоким уровнем в крови и печени витаминов Е и А, а также менее выраженным ингибированием активности основных антиоксидантных ферментов, что является характерным для состояния хронического холодового стресса [1]. Так, активность глутатионпероксидазы у опытных кур была выше в крови – на 40%, в печени – на 71,5%, чем у контрольных. Активность глутатионредуктазы у кур, получавших «Гувитан», была выше в крови и печени на 44,7% и 3% соответственно. У птицы опытной группы установлена также и более высокая активность каталазы в крови.

Таким образом, антиоксидантный препарат «Гувитан» обладает выраженным стресс-протекторным действием, обусловленным, по всей вероятности, его влиянием на ферментативное и неферментативное звенья стресс-лимитирующей системы антиоксидантной защиты организма.

Литература
1. Куликов В. Ю., Семенюк А. В., Колесникова Л. И. Перекисное окисление липидов и холодовой фактор. – Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1988. – 192 с.
2. Рецкий М. И. Система антиоксидантной защиты у животных при стрессе и его фармакологической регуляции: Автореф. дис. … докт. биол. наук. – Воронеж, 1997. – 396 с.

rynok-apk.ru

Стресс-протекторное средство

Владельцы патента RU 2414921:

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к стресспротекторному средству. Применение флавоноида травы вики изменчивой 7-рутинозид диосметина в качестве стресспротекторного средства. Флавоноид травы вики изменчивой 7-рутинозид диосметина эффективен в качестве стресспротекторного средства, достоверно уменьшает площадь и количество язвенных дефектов слизистой оболочки желудка; уменьшает массу надпочечников и увеличивает массу тимуса; значительно снижает активность перекисного окисления липидов в желудке и сыворотке крови; уменьшает выраженность повреждения слизистой оболочки желудка. 3 ил., 3 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и может быть использовано для профилактики и лечения осложнений острых стрессорных воздействий со стороны желудочно-кишечного тракта (ЖКТ).

Основными направлениями профилактики и лечения стресс-повреждений желудка являются антацидная, антисекреторная и гастропротекторная терапия, направленные на поддержание pH выше 3,5 (до 6,0), нормализация моторики желудка, повышение устойчивости слизистого барьера. Исходя из физиологического соотношения между моторно-эвакуаторной функцией желудка и секрецией соляной кислоты, для профилактики и лечения стресс-язв используют: ингибиторы протонной помпы (омепразол); антагонисты H2-рецепторов (H2-блокаторы) (ранитидин); антацидные средства и гастропротекторы (сукральфат). Термин стресс-повреждение желудка, или синдром острого повреждения желудка (СОПЖ) — это повреждения, возникающие при нарушении механизмов его защиты у больных, находящихся в критическом состоянии («Профилактика стресс-повреждений верхнего желудочно-кишечного тракта у больных в критическом состоянии» Методические рекомендации Российская ассоциация специалистов по хирургическим инфекциям (РАСХИ), Москва 2004 г.). Эрозивно-язвенные поражения желудка и двенадцатиперстной кишки выявляют у 75% (40-100%) больных в первые часы пребывания в отделении интенсивной терапии (ОИТ) (Fennerty MB. Crit Care Med 2002; 30 (6): 351-5). Основными причинами повреждения целостности слизистой оболочки желудка являются: локальная ишемия/реперфузия, сопровождающаяся избыточным/аномальным синтезом оксида азота, свободных радикалов, цитокинов, снижением синтеза защитных простагландинов, гибелью эпителиальных клеток и угнетением процесса их регенерации.

Однако проблема профилактики и лечения стресс-повреждения желудка при различных критических состояниях остается острой, поэтому, учитывая патогенез данных состояний, поиск стресспротекторов в ряду веществ с антиоксидантной и антигипоксантной активностью является актуальной задачей.

Цель изобретения: расширение арсенала антистрессорных средств. Цель достигается применением диосмина (7-рутинозид диосметин) в качестве стресспротектора.

В настоящий момент диосмин применяется в клинической практике в качестве венотонизирующего средства. При экспериментальных исследованиях иммобилизационно-болевого стресса было впервые выявлено его стресспротекторное действие.

В эксперименте использовали субстанцию диосмина, выделенную из травы вики изменчивой профессором, заведующим кафедрой органической химии Пятигорской государственной фармацевтической академии Оганесяном Э.Т. Субстанция представляет собой серый порошок, плохо растворимый в воде, который обладает следующими свойствами: взаимодействовать со свободными радикалами; связываться с различными ферментами, изменяя их активность; участвовать в транспорте электронов; образовывать хелатные комплексы с различными ионами металлов. Диосмин (C28H32O15, Тпл 290-293°C) является основным флавоноидом надземной части вики изменчивой, представляет собой 7-рутинозид диосметина. Характерной особенностью данного биозида является высокая прочность гликозидной связи (Шаренко О.М. Химико-технологическое обоснование использования вики изменчивой, вики Гроссгейм и вики обрубленной как источников получения гепатозащитных и венотонизирующих средств: Дисс…канд. фармац. наук. — Пятигорск, 2005). Диосмин — основной компонент многих венотонизирующих препаратов.

Пример. Крысе массой 210 г внутрижелудочно через зонд вводили водный раствор предварительно суспендированной с лецитином субстанции диосмина объемом 1,5-2 мл в дозе 100 мг/кг однократно в течение 7 суток. Затем животное подвергали 24-часовому иммобилизационно-болевому стрессу. На 8-е сутки от начала опыта животное было декапитировано с учетом требований этического комитета. После вскрытия взвешивали тимус, надпочечники и исследовали стрессорное повреждение слизистой оболочки желудка (СОЖ) для оценки «триады» стрессорного повреждения. Кроме того, был произведен забор крови для получения сыворотки, в которой определяли активность перекисного окисления липидов (ПОЛ), а также ткань желудка для гистологического исследования и для получения гомогената, в котором также определяли активность ПОЛ.

При визуальном обследовании слизистая оболочка была слабо гиперемирована, складки не утолщены, единичные точечные кровоизлияния, площадь и количество язвенных дефектов были достоверно меньше, чем в контрольной группе животных (см. табл.1). Масса надпочечников у данной крысы составила 30 и 29 мг, что приближается к среднему значению у интактных животных и значительно ниже среднего показателя у животных контрольной группы. Масса тимуса у данной крысы — 81 мг, что приближается к среднему значению у интактных животных и выше среднего показателя у животных контрольной группы (см. табл.2). В результате исследования активности ПОЛ светосумма в гомогенате желудка данной крысы 58143, что значительно ниже средней величины у контрольных животных и ближе к среднему значению у интактной группы. Значение величины светосуммы в сыворотке крови у опытного животного определено на уровне 73281, что приближается к среднему значению у интактных животных и значительно ниже среднего показателя у животных контрольной группы (см. табл.3).

В результате гистологического исследования срезов ткани желудка интактной крысы патологических изменений не выявлено (см. фото 1). При микроскопическом исследовании препаратов стенки желудка опытной крысы было выявлено значительное уменьшение выраженности повреждений слизистой оболочки желудка по сравнению с животными контрольной группы (см. фото 2, 3).

Лабораторные исследования были выполнены на 30 крысах-самцах линии Вистар массой 200-220 г в осенне-зимний период. Все животные были разделены на контрольную (интактные крысы) и 2 опытные группы (иммобилизационно-болевой стресс; иммобилизационно-болевой стресс+лекарственное вещество).

Количество животных в каждой серии составляло 10 особей. Все экспериментальные животные содержались в обычных условиях вивария в соответствии с нормами кормления и содержания лабораторных животных.

Опытным крысам ежедневно внутрижелудочно вводили водный раствор субстанции диосмина в дозе 100 мг/кг однократно в течение 7 суток. Затем животных подвергали 24-часовому иммобилизационно-болевому стрессу. На 8-е сутки от начала опыта животных декапитировали с учетом требований этического комитета.

После вскрытия желудка оценивали картину слизистой оболочки (количество и площадь язвенных дефектов, наличие признаков кровотечения). Индекс Паулса, или индекс изъязвления, (ИП) определяли по формуле:

где А — среднее количество язв на 1 животное; В — количество животных с язвами в группе (в %). Противоязвенную активность препаратов определяли как отношение ИП контрольной группы к опытной (см. табл.1). Препарат считали активным, если противоязвенная активность в терапевтической дозе равна 2 и более (Пупыкина, К.А. Лечебное действие противоязвенного сбора /К.А.Пупыкина, Н.Ж.Басченко, Н.С.Макара // Фармация. — 2006. — №3. — С.37-38).

Тимус и надпочечники взвешивали с помощью аналитических весов. Иммобилизационно-болевой стресс у крыс приводил к выраженному увеличению массы надпочечников и уменьшению массы тимуса. При введении диосмина масса надпочечников и тимуса приближалась к таковой у интактных животных (см. табл.2).

Оценку показателей свободнорадикального окисления (СРО) проводили методом хемилюминесценции в супернатанте гомогената ткани желудка и сыворотке крови. Исследованию подвергалась сыворотка, отделяемая путем центрифугирования в течение 15 минут при 3000 об/мин цельной крови, собираемой в момент декапитации животных. В качестве оценочного показателя использовалась величина светосуммы, отражающая интенсивность образования свободных радикалов и участие в процессе СРО антиоксидантных систем.

Иммобилизационно-болевой стресс у крыс приводил к выраженному повышению активности процессов перекисного окисления липидов как в желудке, так и в сыворотке крови экспериментальных животных (см. табл.3). Применение соединения приводит к снижению активности ПОЛ в желудке и сыворотке крови животных, получавших диосмин относительно контрольной группы животных (см. табл.3).

В результате гистологического исследования срезов ткани желудка животных было выявлено значительное уменьшение выраженности повреждений слизистой оболочки желудка животных, получавших диосмин по сравнению с животными контрольной группы (см. фото 2, 3).

В ходе экспериментального исследования было установлено, что соединение оказывает стресспротекторное действие, достоверно уменьшая площадь и количество язвенных дефектов слизистой оболочки желудка, достоверно уменьшая массу надпочечников и увеличивая массу тимуса, эффективно снижая активность процессов перекисного окисления липидов, а также выраженность повреждений слизистой оболочки желудка.

Таким образом, выявлено, что диосмин:

1) уменьшает площадь и количество язвенных дефектов слизистой оболочки желудка;

2) уменьшает массу надпочечников и увеличивает массу тимуса;

3) значительно снижает активность перекисного окисления липидов в желудке и сыворотке крови;

4) уменьшает выраженность повреждения слизистой оболочки желудка.

www.findpatent.ru